全国服务热线:

0731-85529965

当前位置: 网站首页 > 资讯中心 > 资讯中心
资讯中心

蓝白斑筛选中IPTG和X-gal的工作原理和使用方法

作者: 汇百小编 来源: 湖南汇百侍 时间:2017年08月11日
细菌蓝白斑筛选原理:IPTG为安慰型诱导物,可诱导β-半乳糖苷酶的产生,X-gal是β-半乳糖苷酶的作用底物,在β-半乳糖苷酶的作用下X-gal被切割成半乳糖和深蓝色的物质:5-溴-4-靛蓝,有色物质可使所在的菌落呈现蓝色。但当含有lac启动子的质粒中插入了外源基因,则不能产生β-半乳糖苷酶,因此不能分解X-gal产生蓝色底物,所在的菌落呈现白色(相对蓝色),这样的菌落才有可能是我们想要的菌株。蓝白斑筛选减轻了在筛选阳性克隆菌落时的工作量。

使用浓度:IPTG浓度:50mg/ml;X-gal浓度:20mg/ml

直接涂板法:取IPTG溶液10l,X-gal溶液20l滴在培养基上,同时滴加50~100l无菌水或无菌LB,用涂布棒涂抹均匀,放至表面无水后即可使用。

预制板:倒板时,在温度降至50℃后。每100mlLB中加入250l的IPTG溶液和500?l的X-gal溶液,混匀后制板即可。

注意:

1、X-gal不溶于水,用二甲基甲酰胺(DMF)溶解;

2、X-gal对光敏感,含有X-gal的平板应该避光保存,在1~2周内使用;

3、过夜培养后蓝白斑显示不明显可将平板放入4℃冰箱中,一段时间后蓝白斑显示会比较明显,便于挑选。



分享到:
相关推荐
Contact Us

0731-85529965

全国统一客服电话

查看地图 长沙市高新技术开发区文轩路27号麓谷钰园C3栋1103室
联系我们

全国服务热线:

0731-85529965
湖南汇百侍生物科技有限公司
手机:13308453923  羊小姐
地址:湖南省长沙市高新技术开发区文轩路27号麓谷钰园C3栋1103室
网站关键词
自主生产及优势产品 系列产品 缓冲液 氨基酸 甾体
-手机二维码-